结合此前讨论的猪葡萄球菌PCR阳性对照相关背景,正确配制需严格遵循以下步骤:
前期准备
在独立的专用区域操作,使用无DNA酶的高压灭菌离心管、带滤芯枪头,提前准备好试剂盒配套的荧光PCR专用模板稀释液。
梯度稀释操作
标记6个离心管,各加入45μL稀释液,取5μL浓度为1×10E8拷贝/μL的原始阳性对照加入首管,震荡1分钟得到1×10E7拷贝/μL的工作液,换枪头依次完成后续10倍梯度稀释,得到6个梯度的阳性对照,全程放冰上待用。
实验用工作对照配制
取10μL上述1000倍稀释后的阳性对照,加入对应体积的无酶水,配制成和待测样本起始体积一致的样品制备阳性对照,即可投入实验使用。
关键注意事项
所有操作全程避免污染样本和试剂盒其他组分,剩余未用完的稀释后对照需分装后-20℃保存,避免反复冻融。
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